在細胞核中,DNA是環(huán)狀附著在核基質(zhì)上,細胞裂解過程中,核基質(zhì)被溶解、抽提,DNA的結(jié)構(gòu)則未發(fā)生變化.如果DNA鏈上存在缺口,則使DNA超螺旋變的松弛,DNA環(huán)向外展,同時由于暴露了陰電荷,在電場力的作用下,松動的DNA環(huán)向陽極遷移,但是由于這種松動的DNA環(huán)一端仍附著于核DNA,其遷移距離受到限制,因此尾長并不總是真實反映鏈缺口的多少.實際應當依靠尾長與尾部的熒光強度同時來進行分析.

 

　　離制備單細胞懸液:體外培養(yǎng)的細胞株:用胰酶消化,吹打成單細胞懸液;體內(nèi)臟器細胞:處死動物,取出臟器,于Hanks’液中制備成單個細胞懸液.取20~50μl于56℃水浴中保溫的0.5%普通熔點瓊脂糖,鋪于磨沙載玻片上,形成底膠.

 

　　取100~150μl0.5%普通熔點瓊脂糖加在底膠上,再于其上加蓋玻片,4℃冷凝10分鐘.取下蓋片,取50~100μl于37℃水浴中保溫的1.0%的低熔點瓊脂糖與50~100μl細胞懸液(105個細胞/ml)混勻,立即鋪片,加上蓋玻片,4℃冷凝10分鐘.去掉蓋玻片,取70~100μl于37℃水浴中保溫的0.5%的低熔點瓊脂糖鋪片,加蓋玻片,4℃冷凝.

 

　　將制備好的膠板去掉蓋玻片后,浸于4℃預冷的細胞裂解液中,4℃裂解1小時.取出膠板,放入電泳槽中,浸泡在電泳液中解旋20分鐘.4℃電泳20分鐘(25V,300mA).電泳結(jié)束,將膠板浸泡于中和液中,每次15分鐘,共中和兩次,注意更換中和液.